血球計數(shù)板的發(fā)明已經(jīng)有超過100年的歷史了，*，這種傳統(tǒng)的細胞計數(shù)方法雖然廉價，但卻很費時費力。其實，除了這點以外，使用血球計數(shù)板進行細胞計數(shù)還有許多可變的因素，使計數(shù)結(jié)果波動，可能會大大影響我們的實驗。

首先，由于使用的是顯微鏡肉眼觀測計數(shù)，人為的因素多，使計數(shù)結(jié)果不準確，誤差大。尤其是經(jīng)過了一整天繁重的實驗后進行計數(shù)，或需要同時對上樣的多種樣品進行計數(shù)時，容易使人頭昏眼花，結(jié)果的準確性更難保證。

第二，重復性差導致實驗結(jié)果可信度低。大家進行細胞實驗時，經(jīng)常需要進行3次以上的平行實驗，以驗證實驗結(jié)果的可重復性和可信度。有時候是同一個操作者分別在幾天重復同一實驗，有時候是不同操作者重復同一實驗。同一操作者細胞計數(shù)的重復性不會太好，不同操作者細胞計數(shù)的重復性就更差了，這會導致上樣量的波動，使得平行實驗的結(jié)果CV值增高，可信度降低，在發(fā)文章的時候達不到評委的要求，實驗結(jié)果有被挑戰(zhàn)，要求重做或補做實驗，或被退回的可能。

第三，需要合適的稀釋倍數(shù)。稀釋不夠，細胞太濃，不僅數(shù)的時間很長，還會導致數(shù)得眼花，數(shù)著數(shù)著就忘記哪些已經(jīng)被數(shù)過，容易數(shù)錯。稀釋過度，細胞太稀，會使細胞分布不均勻，計數(shù)的結(jié)果代表性下降，誤差增大。一般來說，使得稀釋后的細胞在1x10⁵-1x10⁶/mL濃度范圍內(nèi)，使標準計算5個方格共會數(shù)到50~500個細胞。這個濃度范圍很窄，這就要求我們在稀釋細胞前能較好地估計原始樣品的濃度，但很多時候都是很困難的。

第四，由于血球計數(shù)板使用的是抽樣計數(shù)的原理，抽樣計數(shù)時幾個細胞數(shù)目的誤差，會導致原始樣品的細胞數(shù)目的變化被極快地放大。若原始樣品的細胞濃度為2x106/mL，稀釋5倍后，血球計數(shù)板5個標準方格共會數(shù)到200個細胞，若每個方格不小心少數(shù)了3、4個細胞，則計算出來的zui終濃度為1.82x10⁶/mL，會導致原始樣品的濃度產(chǎn)生180,000個/mL的差異。（同樣是原始濃度為2x10⁶/mL的細胞樣品做5倍的稀釋，Scepter 計數(shù)的是50µL稀釋樣品中的全部細胞的數(shù)目（即2x10⁴個細胞），因此能更準確、更地計數(shù)。）

還有，對于壓線的細胞的計數(shù)與否需要遵循前后一致的原則（一般只計數(shù)大方格的上方和右方線上的細胞），這需要計數(shù)時提高熟練程度，才能提高重復性。

血球計數(shù)板升級替代方案

可能不少老師和同學都不知道，血球計數(shù)板是由法國科學家Louis-Charles Malassez于19世紀研發(fā)，用于血細胞計數(shù)，因此而得名。這項古老而又傳統(tǒng)的技術(shù)一直沿用至今，但并未隨著科研進步而發(fā)展，還給越來越多的研究者帶來很多困擾。

升級是硬道理

古語：“工欲善其事，必先利其器”。小米加能獲得抗戰(zhàn)勝利，但恐怕難以贏得現(xiàn)代戰(zhàn)爭。細胞研究應是同理，如今技術(shù)革新已推進到了流式細胞術(shù)，然而國內(nèi)多數(shù)實驗室尚不能負擔的起巨大的投入，或許小型細胞計數(shù)/分析設備是多數(shù)實驗者的。

市場上常見的自動細胞計數(shù)器，其主要可分為兩類：基于圖像的細胞計數(shù)器(Automated vision-based counter)和基于庫爾特電阻抗原理的細胞計數(shù)器（Scepter為代表），兩者原理及操作方法大相徑庭。以下報告將從性、可靠性、便捷性等方面進行比較，希望能對廣大細胞學研究者有所助益。

【準確性比較】

圖1. 不同細胞濃度下各種細胞計數(shù)器的計數(shù)結(jié)果與實際數(shù)值的對比

 
上圖可見：血細胞計數(shù)板在高細胞密度時，計數(shù)結(jié)果與實際細胞密度有偏差，而基于圖像的細胞計數(shù)器則在多個濃度下均有偏差。這表明基于庫爾特原理的細胞計數(shù)方法在計數(shù)準確性上優(yōu)于其他兩種細胞技術(shù)方法。（樣品為常見的COS7細胞）

【可靠性比較】

圖2. 不同細胞濃度下細胞計數(shù)的可重復性比較

 
上圖可見：Scepter的可重復性均明顯好于血細胞計數(shù)板和基于圖像的細胞計數(shù)器。（樣品為19種細胞系）

elisa試劑盒，人血清，放射免疫試劑盒，PCR代測，WB代測，放射免疫代測，進口ELISA試劑盒，酶聯(lián)免疫代測，酶聯(lián)免疫試劑盒，染色液-信帆生物 

 
上圖可見：傳統(tǒng)的血細胞計數(shù)板的計數(shù)時間遠長于其他兩種計數(shù)。庫爾特原理計數(shù)法與基于圖像的細胞計數(shù)法相比，計數(shù)速度更為穩(wěn)定，而且計數(shù)時間約為后者的一半。Scepter計數(shù)時間zui短，平均時間僅為14秒。（樣品為常見的SF9，MCF7，HEK293細胞）

數(shù)據(jù)來源：血細胞計數(shù)板，您還在使用么？

Scepter的人性化設計使得使用者能夠輕易上手，只需要五步：儀器校驗、加載芯片、檢測樣品、卸下芯片、數(shù)據(jù)分析，操作方法和移液器相同，而且便于超凈臺內(nèi)操作。

選擇Scepter™手持式細胞計數(shù)器

以上可見，在滿足多數(shù)研究者基本細胞計數(shù)的要求上，手持式細胞計數(shù)器Scepter表現(xiàn)zui為優(yōu)異。此外，Scepter強大的數(shù)據(jù)分析能力也是其另一大特色。Scepter能夠提供細胞直方圖作為細胞計數(shù)依據(jù)，并且支持離線分析直方圖。通過直方圖可以獲知細胞直徑分布、細胞狀態(tài)、各細胞組分等數(shù)據(jù)。一次操作，更多的信息量，細胞研究水平因此而更上一層樓。因此，Scepter可以說是血球計數(shù)板的升級替代選擇。

索取Scepter產(chǎn)品資料

關(guān)于升級產(chǎn)品Scepter2.0：

 
榮獲諸多獎項的Scepter在2011年升級到了2.0版，新上市的Scepter2.0保留了前代產(chǎn)品直方圖結(jié)果顯示、類似移液器的操作、14秒疾速計數(shù)等諸多特色，新增如下亮點：擴大了可檢測的細胞粒徑（3-36μm），增強了計數(shù)性（在小顆粒物或小直徑細胞上檢測的性增強，CV<5%），同時升級了聯(lián)機軟件的功能，提供更加全面的數(shù)據(jù)分析，使之成為目前市場上小型細胞計數(shù)設備的選擇！同時，前代產(chǎn)品仍可以通過聯(lián)機升級固件，輕松獲得Scepter 2.0的所有功能，而不影響當前的使用效果！更多詳情請垂詢默克生命科學部-2分機。

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