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規(guī)格：200 mL/kit

保存：本產(chǎn)品對(duì)光敏感，應(yīng)該室溫避光儲(chǔ)存，保質(zhì)期 2 年。無(wú)菌開(kāi)封后，保存于室溫。

試劑盒組成：

各種動(dòng)物外周血白細(xì)胞分離液 200mL

細(xì)胞洗滌液 200mL

紅細(xì)胞裂解液 100mL

操作步驟：

1. 取新鮮抗凝全血（EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液。

2. 在離心管中加入適量分離液（血液體積小于5mL時(shí)，加入5mL分離液；大于等于5mL，加入等體積分離液。但二者的總體積不能超過(guò)離心管的三分之二，否則會(huì)影響分離效果），將血液平鋪到分離液液面上方，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后將血液小心的平鋪于分離液上，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町?，將形成明顯的分層界面。如果樣品較多，加樣的時(shí)間較長(zhǎng)，在離心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正常現(xiàn)象。）

3. 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~1000g，離心20~30min（血液的體積越大所需的離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)，zuijia的分離條件需摸索，離心轉(zhuǎn)速zui大不超過(guò)1200g）。

4. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層：zui上層是稀釋的血漿層；血漿與分離液之間是淋巴細(xì)胞層；分離液中為粒細(xì)胞層（個(gè)體差異或者是分離條件不同，粒細(xì)胞層可能分離不明顯）；zui下層為紅細(xì)胞層。
 

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5. 小心的吸取淋巴細(xì)胞層及分離液層細(xì)胞到15mL潔凈的離心管中，10mL PBS或細(xì)胞洗滌液洗滌細(xì)胞。250g，離心10min（如有紅細(xì)胞混雜則加入適量紅細(xì)胞裂解液）

6. 棄上清，5mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞，250g，離心10min。

7. 重復(fù)步驟6

8. 棄上清，細(xì)胞重懸備用。

注意事項(xiàng)：

A. 開(kāi)封前顛倒混勻，本分離液為無(wú)菌產(chǎn)品，為延長(zhǎng)分離液保存時(shí)間，請(qǐng)?jiān)跓o(wú)菌條件下啟封，避免微生物污染。。

B. 分離液使用時(shí)應(yīng)始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預(yù)熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心，可能會(huì)導(dǎo)致白膜層中紅細(xì)胞污染加重。

C. 血液樣本為新鮮抗凝血（采血2 h以內(nèi)），為保持淋巴細(xì)胞的活性，應(yīng)避免冷凍和冷藏。

D. 血液樣本不需稀釋，直接進(jìn)行分離即可。

E. 稀釋血液或洗滌細(xì)胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞凝集，大大降低細(xì)胞得率及純度。
 

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