γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶真的太棒了！

產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃保存。
試劑四：液體×1瓶，4℃保存。
工作液（在試劑二瓶中配制）：臨用前配制，把試劑三倒入試劑二瓶中，充分溶解（室溫過(guò)低
時(shí)可以40℃水浴促進(jìn)溶解）；然后把試劑四倒入試劑二瓶中，混勻后室溫保存。
產(chǎn)品說(shuō)明：
γ-GT是γ-谷氨酰循環(huán)中的關(guān)鍵酶，催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨?；衔锷?br />的γ-谷氨?；D(zhuǎn)移到受體。也可以催化GSH和其他γ-谷氨?；衔锏乃?，產(chǎn)生谷氨酸鹽，在細(xì)
胞外谷胱甘肽新陳代謝中起了重要的作用。
γ-GT催化谷氨酰對(duì)硝基苯胺中γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移給N-甘氨酰甘氨酸，生成對(duì)硝基苯胺，在405nm
有特征光吸收；通過(guò)測(cè)定405nm光吸收增加速率，來(lái)計(jì)算γ-GT酶活性。
自備儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1mL玻璃比色皿和蒸餾水

γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶真的太棒了！
 

操作步驟：
一、粗酶液提取
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL
試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心15min，取上清，置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10
4個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)
胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；
然后8000g，4℃，離心15min，取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血清等液體：直接測(cè)定。
二、γ-GT 測(cè)定操作
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 405 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于 25℃（一般物種）或者 37℃（哺乳動(dòng)物）水浴中預(yù)熱 30min（保證無(wú)沉淀）。
3. 測(cè)定管：取 1mL 玻璃比色皿，依次加入 100μL 上清液，900μL 工作液，混勻后于 405nm 測(cè)定
10 s 和 70 s 時(shí)吸光度，記為 A1 和 A2。、

注意事項(xiàng)：
1. 培養(yǎng)細(xì)胞中γ-GT活性測(cè)定時(shí)，細(xì)胞數(shù)目須在300萬(wàn)-500萬(wàn)之間，細(xì)胞中γ-GT的提取時(shí)可加試劑一
后研磨或超聲波處理，不能用細(xì)胞裂解液處理細(xì)胞（防止因?yàn)榈鞍踪|(zhì)變性導(dǎo)致酶失活）。
2. 配置好的工作液2周內(nèi)使用完畢。

γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶真的太棒了！