游離脂肪酸試劑盒的測定原理，F(xiàn)FA試劑盒供應(yīng)

游離脂肪酸含量測定試劑盒的測定意義：

FFA 既是脂肪水解的產(chǎn)物，又是脂肪合成的底物。FFA 的濃度與脂類代謝、糖代謝、內(nèi)分泌 功能有關(guān)，也可反映食物貯藏中的品質(zhì)變化。

測定原理：

在弱酸性條件下，F(xiàn)FA 與銅鹽反應(yīng)生成銅皂，在 715nm 處有特征吸收峰，在一定范圍內(nèi)游 離脂肪酸含量與顯色程度呈線性關(guān)系。

自備儀器和用品： 研缽、臺式離心機(jī)、可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿。 試劑組成和配制：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。 試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體×1 瓶，4℃保存。

樣品中 FFA 提取：

1、 血液：將所取血液，室溫靜置 1 h 后，于 4 ℃ 離心機(jī) 3500 rpm 離心 15min，取上清 0.1mL， 加 1.2mL 試劑一，震蕩提取 3h，8000rpm，4℃離心 10min，取上清液待測。

2、 組織：組織用蒸餾水沖洗干凈后，用吸水紙吸取表面水分，搗碎后稱取約 0.1g 轉(zhuǎn)移至離 心管，按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：12 的比例加入試劑一，震蕩提取 3h， 8000rpm，4℃離心 10min，取上清液待測。

3、 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1.2 的比例（建 議 500 萬細(xì)胞加入 1.2mL 試劑一）加入試劑一，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超 聲 2 秒，間隔 3 秒，總時間 3min）；震蕩提取 3h，然后 8000rpm，4℃，離心 10min，取 上清待測。

游離脂肪酸試劑盒的測定原理，F(xiàn)FA試劑盒供應(yīng)測定操作：

1. 分光光度計預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長到 715 nm。

2.  對照管：取上清液 1mL，加 0.5mL 試劑二，充分震蕩 5min，室溫靜置 5min，取上層 0.8mL

于 1mL 玻璃比色皿，調(diào)零。

3.  測定管：取上清液 1mL，加 0.5mL 試劑三，充分震蕩 5min，室溫靜置 5min，取上層 0.8mL

于 1mL 玻璃比色皿，測定吸光值，記為 A。 記為 A 測定管。

FFA 含量計算：

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0075 x+ 0.0055，R2=0.994

1. 血液中 FFA 含量計算

FFA（μ mol/L）=(A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷V 樣=1333×(A-0.0055)

2.  組織中 FFA 含量計算

（1）按樣本蛋白濃度計算

FFA（μ mol/mg prot）=(A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷(V 樣×Cpr)= 0.133×(A-0.0055)÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計算

FFA（μ mol/g）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)= 0.16×(A-0.0055)÷W

3.  按細(xì)胞數(shù)量計算

FFA（μ mol/104 cell）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量)

= 0.16×(A-0.0055)÷細(xì)胞數(shù)量

V 樣總：上清液總體積，1.2 mL；V  反總：反應(yīng)總體積，1mL；V 樣：加入樣本體積，1mL；

W：樣本鮮重，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL

游離脂肪酸試劑盒的測定原理，F(xiàn)FA試劑盒供應(yīng)