檢驗(yàn)大腸桿菌

大腸桿菌O157:H7的測(cè)試片檢測(cè)方法
一、大腸桿菌快速檢驗(yàn)測(cè)試片適用范圍：用于各類食品以及人體體檢樣品中大腸桿菌O157:H7的檢測(cè)。以及突發(fā)事件應(yīng)急檢測(cè)需要。

二、大腸桿菌的快速方法原理和方法：采用選擇性顯色培養(yǎng)基作為主要原料，加入專一性酶顯色劑，運(yùn)用微生物測(cè)試片技術(shù)，做成一次性快速檢驗(yàn)產(chǎn)品，通過(guò)接種、培養(yǎng)，如果樣品中含有大腸桿菌O157:H7，即可在紙片上呈現(xiàn)紫紅色的菌落。 樣品處理：無(wú)菌操作取25g(mL)樣品放入含有225mL無(wú)菌生理鹽水的采樣瓶或均質(zhì)杯內(nèi)，充分振搖或置均質(zhì)器中制成樣品勻液，靜置片刻。接種：將測(cè)試片水平放在臺(tái)面上，小心揭開(kāi)上蓋膜，用滅菌吸管吸取1 mL樣品上清液或增菌液，均勻加到中央的濾紙片上，然后輕輕將上蓋膜放下，靜置5min。每個(gè)樣品接種兩片。培養(yǎng)：將加了樣的測(cè)試片疊放在一起，放入原來(lái)的自封袋中，堆疊片數(shù)不超過(guò)12片，透明膜向上平放在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)15h～24h。呈紫紅色的菌落為大腸桿菌O157:H7;呈藍(lán)色的菌落為其他大腸菌群。

三、 注意事項(xiàng)：本法還可應(yīng)用于從業(yè)人員體檢、中毒樣品和物體表面的檢測(cè)，用取樣棉簽涂抹被測(cè)物體表面，放入裝有3mL滅菌生理鹽水的試管中，搖晃10s，然后取1mL接種到測(cè)試片上。注意使用過(guò)的紙片上帶有活菌，需及時(shí)按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。出現(xiàn)陽(yáng)性菌落的樣本，zui-好用其他更為可靠的方法進(jìn)行驗(yàn)證，沒(méi)有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗(yàn)一次。

大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測(cè)試方法
大腸桿菌耐熱檢驗(yàn)方法適用于各種水樣中大腸埃希氏菌和耐熱大腸菌群的快速檢驗(yàn)；其原理是：利用耐熱大腸菌群是總大腸菌群的一部分.將培養(yǎng)溫度提高到44～45℃，在此條件下仍能生長(zhǎng)和發(fā)酵乳糖的菌群被稱為耐熱大腸菌群。它們由埃希氏菌屬以及克雷伯菌屬、腸桿菌屬和檸檬酸桿菌屬中的一些菌種組成。其中大腸埃希氏菌(E.coli) 是zui準(zhǔn)確和專一的糞便污染指示菌。與總大腸菌群相比，耐熱大腸菌群在水體中的檢出，說(shuō)明水體更為不清潔，存在腸道致病菌和食物中毒菌的可能性更大。大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測(cè)試片運(yùn)用酶底物技術(shù)，含有大腸埃希氏菌*葡萄糖醛酸酶(glucuronidase)的顯色底物(XGLUC/blue)，以及耐熱大腸菌群半乳糖苷酶(galactosidase)的顯色底物(SalmonGal/red), 經(jīng)過(guò)44.5℃培養(yǎng)后，大腸埃希氏菌顯紫藍(lán)色，紅色或紫藍(lán)色菌斑都屬耐熱大腸菌群。

大腸桿菌的快速檢驗(yàn)方法對(duì)于大腸菌群檢驗(yàn)顯示陽(yáng)性的紙片或產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管，用接種環(huán)挑取菌液，轉(zhuǎn)入2-3mL無(wú)菌水中混勻，用滅菌吸管吸取1mL慢慢均勻地滴加到大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測(cè)試片上，然后放下上層膜，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下。將接種好的紙片平放于培養(yǎng)箱中，44.5℃培養(yǎng)15～24h觀察結(jié)果。測(cè)試片上出現(xiàn)紅色或紫藍(lán)色菌斑都是耐熱大腸菌群陽(yáng)性，其中紫藍(lán)色為大腸埃希氏菌陽(yáng)性。沒(méi)有紅色或紫藍(lán)色斑點(diǎn)為陰性結(jié)果。