常用實驗室的制備

一、乳糖膽鹽發(fā)酵管

1、成分：蛋白胨20g，豬膽鹽（或牛、羊膽鹽）5g，乳糖10g，0.04%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）溴甲酚紫水溶液25ml，蒸餾水1000ml（PH值7.4）

2、制法：將蛋白胨、膽鹽及乳糖溶于水中，校正PH值，加入指示劑，分裝每管10ml，并放入一個小倒管，115℃高壓滅菌15min

注：雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外，其他成分加倍。

二、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基

1、成分：蛋白胨10g，牛肉-膏3g，NaCL5g，瓊脂15~20g，蒸餾水1000ml

2、制法：將除瓊脂以外的各種成分溶解于蒸餾水內(nèi)，加入15%NaOH溶液約2ml，校正PH值至7.2~7

.4。加入瓊脂，加熱煮沸，使瓊脂溶化。分裝于燒瓶（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）內(nèi)，121℃高壓滅菌15min。

注：此培養(yǎng)基可供一般細(xì)菌培養(yǎng)之用，可傾注平板或制成斜面。若用于菌落計數(shù)，瓊脂質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%；若做成平板或斜面，則應(yīng)為2%

三、乳糖發(fā)酵管

1、成分：蛋白胨20g，乳糖10g，0.4g/l溴甲酚紫水溶液25ml，蒸餾水1000ml（PH值=7.4）

2、制法：將蛋白胨及乳糖溶于水中，校正PH值，加入指示劑后，按檢驗要求分裝30ml、10ml或3ml，并放入一個小倒管，115℃高壓滅菌15min

注：①雙料乳糖發(fā)酵管除蒸餾水外，其他成分加倍。②30ml和10ml。乳糖發(fā)酵管專-供醬油及醬類檢驗用，3ml乳糖發(fā)酵管供大腸菌群證實實驗用。

四、馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）

1、成分

馬鈴薯300g，葡萄糖20g，瓊脂20g，蒸餾水1000ml

2、制法

將馬鈴薯去皮切塊，加1000ml蒸餾水，煮沸10~20min。用紗布過濾，補(bǔ)加蒸餾水至1000ml.加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶化，分裝，121℃高壓滅菌20min

3、用途：分離培養(yǎng)霉菌

五、孟加拉紅培養(yǎng)基

1、成分

蛋白胨5g，葡萄糖10g，MgSO4(MgSO4·7H2O)0.5g,KH2PO41g，瓊脂20g，1/3000孟加拉紅溶液100ml，蒸餾水1000ml，氯霉素0.1g

2、制法

將上述各成分加入蒸餾水中溶解后，再加孟加拉紅溶液。另用少量乙醇溶液溶解氯霉素，加入培養(yǎng)基中，分裝后，121℃高壓滅菌20min

3、用途：分離霉菌和酵母

六、0.1%美藍(lán)牛乳培養(yǎng)基

1、成分

新鮮脫脂牛乳90ml，10g/L美藍(lán)水溶液10ml

2、制法

將上述成分混合，分裝試管，121℃高壓滅菌15min

七、伊紅美藍(lán)瓊脂（EMB）

1、成分：蛋白胨10g，乳糖10g，K2HPO42g，瓊脂17g，2%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）伊紅Y溶液20ml，6.5g/l美藍(lán)溶液10ml，蒸餾水1000ml（PH值=7.1）

2、制法：將蛋白胨、磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中，校正PH值，分裝于燒瓶內(nèi)，121℃高壓滅菌15min，備用。臨用時加入乳糖并加熱溶化瓊脂，冷卻至50~55℃，加入伊紅和美藍(lán)溶液，搖勻，傾注平板。

八、革蘭氏染色法

1、結(jié)晶紫染色液

（1）成分：結(jié)晶紫1g，95%（體積分?jǐn)?shù)）乙醇20ml，10g/L草酸銨水溶液80ml。

（2）制法：將結(jié)晶紫溶解于乙醇中，然后與草酸銨溶液混合。

2、革蘭氏碘液

（1）成分碘1g，KI2g，蒸餾水300ml

（2）制法：先將碘與KI進(jìn)行混合，然后加入蒸餾水少許，充分振蕩，待*溶解后，再加蒸餾水至300ml

3、沙黃復(fù)染液

（1）成分：沙黃0.25g，95%（體積分?jǐn)?shù)）乙醇10ml，蒸餾水90ml

（2）制法：將沙黃溶解于乙醇中，然后用蒸餾水稀釋

七、高鹽察氏培養(yǎng)基

1、成分：NaNO32g，蒸餾水1000ml，MgSO4(MgSO4·7H2O)0.5g,KH2PO41g，F(xiàn)eSO40.01g，NaCL60g,蔗糖30g，瓊脂20g，KCL0.5g

2、制法：加熱溶解分裝后，115℃高壓滅菌30min。必要時可酌量增加瓊脂。

3、用途：分離霉菌用

八、65g/LNaCL肉湯

1、成分

肉浸液（PH=7.6）100ml，NaCL6.5g

2、制法

將上述成分混合，分裝試管，121℃高壓滅菌15min

九、PH=9.6葡萄糖肉湯

普通肉湯校正PH=9.6，加入0.2%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）葡萄糖

十、40%（體積分?jǐn)?shù)）膽汁肉湯

1、成分

PH=7.6肉浸液60ml，葡萄糖0.12g，牛膽汁40ml

2、制法

將上述成分混合，分裝試管，121℃高壓滅菌15min

十一、淀粉水解培養(yǎng)基

1、成分

PH=7.6肉浸液瓊脂90ml，羊血清5ml，30g/l淀粉溶液10ml

2、制法

1）將肉浸液瓊脂溶化

2）待冷卻至50℃左右，以無菌操作加入淀粉溶液及無菌羊血清混合后，傾注平板。

十二、精氨酸水解培養(yǎng)基

1、成分

蛋白胨0.1g，NaCL0.5g，K2HPO40.6g，精氨酸1g，16g/l溴甲酚紫乙醇溶液1.4ml，瓊脂0.3g，蒸餾水100ml（PH=7.2）

2、制法

將上述各成分（除溴甲酚紫乙醇溶液外）加入蒸餾水中，加熱溶解，校正PH=7.2，加入溴甲酚紫乙醇溶液，分裝試管，121℃高壓滅菌15~20min

十三、改良CHAIMERS培養(yǎng)基

1、成分

大豆蛋白胨3g，肉浸膏3g，酵母浸膏3g，葡萄糖20g，乳糖20g，CaCO320g，10g/l中性紅溶液5ml，硫酸多黏菌素B（100IU/ml），瓊脂15g，蒸餾水1000ml（PH=6.0）

2、制法

加熱溶解各組分，加熱至120℃高壓滅菌15~20min

十四、七葉苷培養(yǎng)基

十五、改良TJA培養(yǎng)基（改良番茄汁瓊脂培養(yǎng)基）

1、成分

番茄汁50ml，酵母抽提液5g，肉膏10g，乳糖20g，葡萄糖2g，K2HPO42g，吐溫801g，乙酸鈉5g，蒸餾水1000ml（PH=6.8±0.2）

2、制法

1）番茄汁的制作：將新鮮番茄洗凈，切碎（切勿搗碎），放入三角燒瓶；置4℃冰箱中8~12h，取出后用紗布過濾即可。若一次使用不完，將其置入0℃冰箱可保存4個月。使用時讓其在常溫下自然溶解。

2）培養(yǎng)基的制法：將成分加入蒸餾水中，加熱溶解，校正PH=6.8±0.2。分裝于燒瓶內(nèi)，高壓滅菌121℃，15~20min。臨用時加熱溶化瓊脂，冷卻至50℃時使用。

十六、改良MC培養(yǎng)基

1、成分

大豆蛋白胨5g，牛肉浸膏5g，酵母浸膏5g，葡萄糖20g，乳糖20g，CaCO310g，瓊脂15g，蒸餾水1000ml，硫酸多黏菌素B（10萬單位）

2、制法

將前面7種成分加入蒸餾水中，加熱溶解，校正PH=6，加入中性紅溶液。分裝于燒瓶內(nèi)，121℃高壓滅菌15~20min。臨用時加熱溶化瓊脂，冷卻至50℃，酌情加或不加硫酸多黏菌素B（檢樣有胖聽或開罐后有異味等懷疑有雜菌污染時，可加多黏菌素B，混勻后使用）



1、成分

蛋白胨5g，K2HPO41g，七葉苷3g，枸櫞酸鐵0.5g，16g/l溴甲酚紫乙醇溶液1.4ml，蒸餾水100ml

2、制法

將上述各成分（除溴甲酚紫乙醇溶液外）加入蒸餾水中，加熱溶解，加入溴甲酚紫乙醇溶液，分裝試管，121℃高壓滅菌15~20min

十七、ML7培養(yǎng)基

1、成分

植物蛋白胨5g，聚蛋白胨5g，牛肉-膏2.5g，酵母提取物5g，抗壞血酸0.5g，瓊脂15g，B-甘油磷酸二鈉19g，MgSO4 (MgSO4·7H2O)0.25g，蒸餾水1000ml（PH=7.1）

2、制法

加熱溶解各組分，加熱至120℃滅菌15min

十八、MRS培養(yǎng)基

1、成分

蛋白胨10g，肉浸膏10g，酵母浸膏5g，葡萄糖20g，吐溫80 1ml，K2HPO42g，醋酸鈉5g，檸檬酸二銨2g，MgSO4 (MgSO4·7H2O)2g，MnSO4(MnSO4·4H2O)50mg，瓊脂15g，蒸餾水1000ml（PH=6.2~6.4）

2、制法

加熱溶解各組分，于120℃滅菌15min

十九、乳酸桿菌糖發(fā)酵管

1、基礎(chǔ)成分

牛肉-膏5g，蛋白胨5g，酵母浸膏5g，吐溫80 0.5ml，瓊脂1.5g，16g/l溴甲酚紫乙醇溶液1.4ml，蒸餾水1000ml

2、按0.5%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）加入所需糖類，并分裝小試管