信帆生物為您提供：蘇木精-伊紅染色操作步驟，HE染色原理

木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，簡(jiǎn)稱(chēng)HE染色法 ，石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色 ；伊紅為酸性染料 ，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。

HE染色法，即是蘇木精-伊紅染色法。石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色；伊紅為酸性染料，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色。易于被堿性或酸性染料著色的性質(zhì)分別稱(chēng)為嗜堿性和嗜酸性；若于兩種染料的親和力都不強(qiáng)，則稱(chēng)中性。一般的組織變化和組織產(chǎn)物都可以通過(guò)這一染色法顯示出來(lái)。是形態(tài)學(xué)常用的染色方法。直到目前為止，病理組織學(xué)的基本知識(shí)，絕大多數(shù)都是從觀察HE染色標(biāo)本中得來(lái)，在質(zhì)量較佳的HE染色切片上，各種組織或細(xì)胞的一般形態(tài)結(jié)特點(diǎn)都可以觀察到。

去氧核糖核酸（DNA）兩條鏈上的磷酸基向外，帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中稱(chēng)藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷的陽(yáng)離子結(jié)合使胞漿染色，細(xì)胞漿、紅細(xì)胞、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明對(duì)比。伊紅是細(xì)胞漿的良好染料。

由于組織或細(xì)胞的不同成分對(duì)蘇木精的親和力不同及染色性質(zhì)不一樣。經(jīng)蘇木精染色后，細(xì)胞核及鈣鹽粘液等呈藍(lán)色，可用鹽酸酒精分化和弱堿性溶液顯藍(lán)，如處理適宜，可使細(xì)胞核著清楚的深藍(lán)色，胞漿等其它成分脫色。再利用胞漿染料伊紅染胞漿，使胞漿的各種不同成分又呈現(xiàn)出深淺不同的粉紅色。故各種組織或細(xì)胞成分與病變的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)均可顯示出來(lái)。

易于被堿性或酸性染料著色的性質(zhì)稱(chēng)為嗜堿性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia )；而對(duì)堿性染料和酸性染料親和力都比較弱的現(xiàn)象稱(chēng)為中性（neutrophilia)。

組織內(nèi)的蛋白質(zhì)構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸的種類(lèi)很多，它們有不同的等電點(diǎn)。在普通染色法中，染色液的酸堿度為pH6左右，細(xì)胞內(nèi)的酸性物質(zhì)如細(xì)胞核的染色質(zhì)、腺細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的粗面內(nèi)膜質(zhì)及透明軟骨基質(zhì)等均被堿性染料染色，這些物質(zhì)稱(chēng)為。而細(xì)胞質(zhì)中的其它蛋白質(zhì)如紅細(xì)胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細(xì)胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色，這些物質(zhì)稱(chēng)為嗜酸型。如果改變?nèi)旧旱乃釅A度，pH值升高時(shí)，則原來(lái)被酸性染料染色的物質(zhì)可變?yōu)槭葔A性；pH值降低時(shí)，原來(lái)被堿性染料染色的物質(zhì)則可變?yōu)槭人嵝?。所以說(shuō)染色液的pH值可以影響染色的反應(yīng)。

脫氧核糖核酸（DNA）兩條鏈上的磷酸基向外，帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷的陽(yáng)離子結(jié)合使胞漿染色，細(xì)胞漿、紅細(xì)胞、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明對(duì)比。伊紅是細(xì)胞漿的良好染料。

由于組織或細(xì)胞的不同成分對(duì)蘇木精的親和力不同及染色性質(zhì)不一樣。經(jīng)蘇木精染色后，細(xì)胞核及鈣鹽粘液等呈藍(lán)色，可用鹽酸酒精分化和弱堿性溶液顯藍(lán)，如處理適宜，可使細(xì)胞核著清楚的深藍(lán)色，胞漿等其它成分脫色。再利用胞漿染料伊紅染胞漿，使胞漿的各種不同成分又呈現(xiàn)出深淺不同的粉紅色。故各種組織或細(xì)胞成分與病變的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)均可顯示出來(lái)。

HE染色結(jié)果

細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色，軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色，粘液呈灰藍(lán)色。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色，胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強(qiáng)的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色，彈力纖維呈亮粉紅色，紅血球呈橘紅色，蛋白性液體呈粉紅色。[1]?

著色的情況與組織或細(xì)胞的種類(lèi)有關(guān)，也隨其生活周期及病理變化而改變。例如，細(xì)胞在新生時(shí)期胞漿對(duì)伊紅著色較淡或輕度嗜堿，當(dāng)其衰老時(shí)或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時(shí)，伊紅著色由淺變深。

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