信帆生物組織學習了T2毒素ELISA試劑盒檢測流程

信帆生物本月組織學習了T2毒素ELISA試劑盒操作流程，讓公司員工對該試劑盒有了一個全新的認識，對檢測步驟和方法也有了更加深入的了解，對于大家來說對以后的組織開展工作都有了一個提高，讓大家都對產品更加清楚明了。

下面我們跟著信帆生物一起來了解一下今天的學習內容吧！

T-2 毒素（T-2 Toxin）ELISA 檢測試劑盒

【概要】T-2 毒素是一類單端孢霉烯族真菌毒素（trichothecenes）中一個具有代表性的毒素。這類真菌廣泛地生存于土壤、植物和其他基質上，侵染麥類、玉米等田間作物，除使谷物減產外，還能生有毒物質，人畜食后，可引起中毒。現在主要有薄層、氣相、高壓液相、質譜等方法。酶免檢測分析方法具有方法穩(wěn)定、試劑便于保存、靈敏度高的優(yōu)點，成為重要的定性定量的分析方法之一。
【適用范圍】
本試劑盒可定性、定量檢測玉米、玉米粉、玉米胚芽及其制品和飼料中的T-2 毒素。
【試驗原理】
本試劑盒采用間接競爭ELISA 方法，在酶標板微孔條上預包被T-2 毒素抗原，樣本中T-2 毒素和此抗原競爭結合抗T-2 毒素抗體（抗試劑），同時抗T-2 毒素抗體與酶標二抗（酶標物）相結合，經TMB 底物顯色，樣本吸光值與其所含T-2毒素的含量成負相關，對照標準曲線，再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣品中T-2 毒素的含量。
【試劑盒組成】
1. 96 孔板（8 孔*12 條）
2. T-2 毒素標準溶液×6 瓶：（1.5mL/瓶）
0 ng/mL,2.5 ng/mL, 5 ng/mL，10ng/mL,20 ng/mL,40 ng/mL
3. T-2 毒素酶標物1 瓶.....................................................6mL
4. T-2 毒素抗試劑1 瓶....................................................6mL
5. 底物液1 瓶.....................................................................6mL
6. 顯色液1 瓶.....................................................................6mL
7. 終止液1 瓶....................................................................6mL
8. 濃縮洗滌液（20×）1 瓶......................................... 20mL
9. 反應板支架..................................................................1 塊
注：48 孔型號試劑盒內容物數量、體積略有差別。
【需要而未提供的設備和試劑】
----酶標儀450nm
----振蕩器
----離心機
----粉碎機
----天平：感量0.01g
----微量移液器：單道20?L～200?L、100?L～1000?L
----甲醇
----去離子水
注：以上儀器均可代購
【試劑配制】
洗滌工作液： 將濃縮洗滌液用去離子水按1:19 體積比進行稀釋（1 份濃縮洗滌液+19 份去離子水）。70%甲醇水：取無水甲醇，用去離子水按7:3 體積比例稀釋（7份無水甲醇＋3 份水）。
【樣本前處理步驟】
玉米及其制品、飼料原料及成品（稀釋倍數：28）
1. 取5.0g 粉碎好的樣品，加入20mL 70%甲醇水，混勻；
2. 充分振蕩15min 后過濾或4000rpm 離心5-10min；
3. 將濾液或上清液用去離子水以1:6 稀釋（例：0.5mL 濾液+3mL 去離子水），充分混勻后即為待測樣液；
4. 稀釋后的待測樣液需pH 值約7.0 左右，移取該液50uL進行檢測。
注意：若樣品中T-2 毒素偏高，建議將樣品提取液用10%甲醇-水再進一步稀釋后檢測。
【檢測步驟】
一、測定前須知：
1. 使用之前將試劑和所需板條回溫（20～25℃）。
2. 使用之后立即將試劑及剩余板條放置2～8℃。
3. ELISA 分析中的再現性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA 操作中的要點。
4. 在恒溫孵育過程中，避免光線照射，可用蓋板膜蓋住微孔板。
二、操作步驟：
1. 將所需試劑及微孔板取出，放置室溫（20~25℃）30min以上，液體試劑使用前均須搖勻。
2. 取出所需數量的微孔板，將不用的微孔板放回鋁箔袋中，放置于2~8℃冷藏。不可冷凍。
3. 配置好的洗滌工作液在使用前也需回溫。
4. 將樣本和標準品對應微孔編號，建議每個樣本和標準品做2 孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
5. 每孔加入250μL 左右洗滌液，洗滌液不得溢出，放置40s左右，甩掉洗滌液，在吸水紙上拍干。
6. 分別加入標準溶液/待測樣液50?L 到對應的微孔中，再加入酶標物50?L/孔，后加入抗試50?L/孔，輕輕震蕩混勻，遮蓋后37℃恒溫培養(yǎng)箱中反應30min。
7. 小心揭開蓋板，甩掉反應液，加入洗滌液250μL/孔充分洗滌5 次，每次間隔40s，用吸水紙拍干。
8. 每孔分別加入底物液和顯色液各50μL，輕輕震蕩混勻，遮蓋后37℃恒溫培養(yǎng)箱中顯色15min。
9. 加入終止液50?L/孔，輕輕震蕩混勻，設酶標儀于450nm處讀取每孔OD 值。(若無酶標儀，則不加終止用目測法可進行判定)。
【結果判定】
標準曲線的繪制與計算用酶標儀測得每孔的光密度值(A)，繪制標準曲線。通過準曲線，可準確定量樣品中T-2 毒素含量。標準曲線：橫坐標為T-2 毒素標準濃度的對數，縱坐標為百分比（即各標準品孔和樣品孔光密度值除以0 ng/mL 標準液孔光密度值(A0)再乘以%所得，光密度值(標準孔或樣品孔) ／光密度值(A0)×%=％(縱坐標)）。相應每個樣品的T-2 毒素濃度可從曲線上獲得。歡迎索取專門的數據處理

軟件進行計算。
備注：試劑盒初篩后，若出現陽性結果，建議用仲裁法進一步確證。
【注意事項】
1. 試劑及樣本沒有恢復到室溫（20~25℃）會導致標準的OD 值偏低。
2. 在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
3. 每種試劑使用前均需搖勻。
4. 反應終止液為2M 硫酸，避免接觸皮膚。
5. 不要使用過了有效期的試劑盒；也不要摻雜使用過了有效期的試劑盒；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6. 儲存條件：試劑盒保存于2~8℃，不能冷凍，將不用的微孔板重新真空密封。標準物質和無色的顯色劑對光敏感，因此要避光保存。
7. 試劑變質的跡象：顯色試劑有任何顏色表明顯色劑變質，應當棄之。0 標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。
8. 對玻璃器皿和T-2 毒素溶液消毒好用次氯酸鈉（10%，v/v）溶液浸泡過夜。
【貯藏條件及保存期】
貯藏條件：保存試劑盒于2～8℃。
保存期：該產品有效期為6 個月。生物試劑日期見包裝盒。
 

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