甲胎蛋白(AFP)放免檢測服務供應-信帆生物

通用名：碘[125I]甲胎蛋白放射免疫分析藥盒
漢語拼音：Dian [125I] Jiataidanbai Fangshemianyifenxi Yaohe
英文名：Iodine [125I] Alphafetoprotein Radioimmunoassay Kit
簡稱：碘[125I]- AFP 放免藥盒
[使用目的]
用于人血清樣本中甲胎蛋白(AFP)的定量測定
[試驗原理]
血清中甲胎蛋白（AFP）的檢測主要用于1、原發(fā)性肝細胞癌的診斷和監(jiān)測。AFP 的測定
為原發(fā)性肝細胞癌的早期診斷和監(jiān)測及肝癌流行病調(diào)查和理論研究提供了重要依據(jù)，是
用的腫瘤標志物之一。2.通過血清及羊水AFP 的檢測對先天性胎兒畸形的早期診斷
有實用價值。
本品采用了第二抗體＋聚已二醇沉淀法放射免疫分析試驗原理：含甲胎蛋白（AFP）的樣
品和125I 標記的甲胎蛋白（AFP）與相應的抗體反應形成抗原抗體復合物。反應后加入二
抗及PEG，使免疫復合物沉淀，離心，測沉淀放射性計數(shù)。通過標準曲線得到樣本中AFP
的濃度。
[試劑主要組成成分]
1. AFP 標準品：一套共7 瓶，以不含AFP 的人血清為基質，用時輕輕搖勻，2～8℃冷存。
AFP 標準品濃度
2.質控血清：三瓶，0.5 ml／瓶，2～8℃冷存。
3.抗AFP 血清： 藍色溶液，2～8℃冷存。
4.125I-AFP 標記物： 紅色溶液，2～8℃冷存。
5 分離劑：藍色溶液，充分搖勻后使用，2～8℃冷存。
[儀器]
1、γ－計數(shù)器
2、低溫離心機
3、恒溫水浴箱
[樣本要求]
110 微升人血清樣本。
采靜脈血5ml 于塑料試管中，靜置使其凝固后，1500 轉／分離心，取其上清液，放
A B C D E F G 單位
0 10 20 50 100 200 400 ng/mL
置玻璃瓶中。如果樣本不立即使用，可在-18℃~-25℃儲存6 個月。
嚴重溶血、高濃度的脂類、膽紅素對測定結果有影響。
[實驗方法]
1、將實驗所需試劑及樣本放置室溫，平衡至少30 分鐘以上才可進行操作；
2、取60X12mm 聚苯乙烯管進行編號，所有實驗均做雙管重復；
3、取每個濃度的標準品、質控血清和樣本100μl 加入相應編號的試管中；
4、每管均各加入100μl 標記物工作液；
5、每管均各加入100μl 抗體工作液，充分混勻；
6、37℃溫育3 小時；
7、每管均各加入500μl 分離劑后，充分混勻；
8、室溫放置30 分鐘后，離心3500 轉／分，20 分鐘后，吸去或傾倒掉上清液；
9、用γ-計數(shù)器測定每管1 分鐘的放射性強度計數(shù)；
10、從標準曲線上讀取樣本及質控血清的濃度。
操作流程(Assay Procedure)

[實驗過程中應注意]
1、γ-計數(shù)器本底計數(shù)應≤100CPM/分，效率應≥75％；
2、加入放射性標記物時，應做好防護、小心謹慎，以避免造成放射性污染；
3、如果某一個樣本的測定值高于濃度的標準品濃度，用零標準品以1：2 或1：
4 的比例稀釋樣本后重新測試，測試結果乘以相應的稀釋倍數(shù)。

[質量控制]
每次實驗操作應至少采用兩個濃度的質控血清進行質量控制，以確保每次實驗測定結果
的可靠性。
1、質控血清的平均值應在允許范圍內(nèi)；
2、曲線方程應采用擬合方式；
3、重復樣本的測定結果相差在15％以內(nèi)。
如不能同時滿足以上條件，則此次試驗結果無效，全部試驗需重新進行。

[測定結果的計算]
1、計算標準品（B~G）、質控品和樣品與標準品A 的比值
2、劑量-反應曲線按“對數(shù)劑量-結合率對數(shù)”（Log(dose-Log(B/Bmax))數(shù)學模型或
四參數(shù)數(shù)學模型擬合，通過每個標準品的B/B0 和其濃度建立標準曲線；
3、從標準曲線上查出樣本的濃度值，B/B0 不在標準曲線之內(nèi)的樣本及其濃度

[實驗的局限性]
1、本品僅供體外診斷使用，只能用于人血清樣本的測定而不能用于其他體液樣本；
2、通過其它方法得到的AFP 值與本品測定結果不具有直接的可比性；

[產(chǎn)品性能指標]
1、靈敏度：
取藥盒中校準試劑A 點（0 劑量）作20 平行管，求其均值X 及偏差SD，從劑量—反應
曲線上查出與X+2SD 相對應的劑量值，確定為本藥盒的靈敏度（小檢出值），為

1.28ng/mL。
2、精密度：
精密度是質量控制的基本參數(shù)，用批內(nèi)變異系數(shù)和批間變異系數(shù)確定。要求批內(nèi)變異系
數(shù)< 10% ，批間變異系數(shù)< 15% 。
B/B0×100 = 標準或樣品(STD or Samples)(CPM)—NSB(CPM)
A 標準(STD)(CPM)—NSB(CPM)
×100
批內(nèi)變異系數(shù):指不同濃度的三個樣品C1、C2、C3 同時分別進行多個復管一次測定中
的重復性，應小于10%。
C1 C2 C3
批內(nèi)變異系數(shù)5.95% 6.43% 4.98%
批內(nèi)變異系數(shù)均小于10%。
批間變異系數(shù):指不同濃度的三個樣品C1、C2、C3 在多次測定間的重復性，應小于15%。
C1 C2 C3
批間變異系數(shù)7.27% 6.45% 4.51%
批間變異系數(shù)均小于15%。
3、測定范圍：
采用零標準品添加高濃度的AFP,確定本試劑盒的測定范圍為0～800 ng/ml
[注意事項]
1、全部試劑應避光貯于2-8℃并在使用前應在室溫下（17-27℃）平衡。
2、該產(chǎn)品在制備過程中所用的血清均經(jīng)檢測，他們對HBsAg、HIV 無反應。但即使這樣也
不會保證對所有的傳染性因素進行檢測。由于沒有一個明確的測試方法能*保證不會出現(xiàn)
HBsAg、HIV 或其他傳染病毒，所以所有的產(chǎn)品包括來自人體的物質都應按良好的實驗室規(guī)
范，按疾病預防和控制中心的有關規(guī)定要求進行預防。
3、樣本濃度過高，在分析前用保溫液稀釋，結果乘以稀釋倍數(shù)。
4、血清正常值，僅供參考，使用單位應建立自己實驗室的正常值。
正常血清參考值＜20ng/ml

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