原位雜交（FISH、FISH、IF三染）

服務(wù)介紹：

原位雜交與免疫熒光原理：原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知序列核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交，從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過(guò)程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。免疫熒光就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體或抗原上，與其相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。

通過(guò)原位雜交雙探針及免疫熒光進(jìn)行三標(biāo)，可以在組織細(xì)胞中對(duì)核酸分子和蛋白指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行共定位、以及定性分析，可以用來(lái)從共定位角度提示核酸和蛋白存在相互作用。

實(shí)驗(yàn)流程：

石蠟切片熒光探針原位雜交雙探針與免疫熒光三染實(shí)驗(yàn)步驟

1. 組織固定、脫水、切片、石蠟切片脫蠟至水;

2. 消化：切片于修復(fù)液中煮沸10-15分鐘，滴加蛋白酶K消化;

3. 預(yù)雜交：滴加預(yù)雜交液，37°C孵育1h。

4. 雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針probe1+probe2 雜交液, 濃度 ，恒溫箱 度雜交過(guò)夜。

5. 雜交后洗滌：SSC洗滌;

6. 孵育一抗、二抗：滴加一抗，4℃過(guò)夜，后PBS洗3×5min;滴加相應(yīng)二抗，室溫孵育50min，PBS洗3×5min;

7. DAPI復(fù)染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min;

8. 鏡檢拍照;

送樣要求：

1、切片前處理要求：新鮮組織干冰運(yùn)輸后做冰凍切片；或取2mm左右厚度的新鮮組織，5min內(nèi)投入原位雜交固定液內(nèi)固定，4℃低溫保存運(yùn)輸，切勿冷凍結(jié)冰，盡快包埋切片后進(jìn)行原位雜交實(shí)驗(yàn)，固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)影響核酸檢出率；

2、冰凍切片：冰凍切片-20℃運(yùn)輸；

3、石蠟切片：石蠟切片常溫運(yùn)輸；

4、細(xì)胞爬片：細(xì)胞爬片加原位雜交固定液固定15min后，換無(wú)酶PBS，密封，4℃運(yùn)輸。 

單據(jù)填寫(xiě)：

1、探針合成：需提供待測(cè)目的基因序列或基因登錄號(hào)、所需標(biāo)記類型；

2、自帶探針需告知完整探針信息；

3、寫(xiě)明檢測(cè)要求。