EdU染色

服務(wù)介紹：

EdU（5-Ethynyl-2’- deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在復(fù)制的DNA分子中，通過基于EdU與Apollo®熒光染料的特異性反應(yīng)快速檢測細胞DNA復(fù)制活性，適用于細胞增殖、細胞分化、生長與發(fā)育、DNA修復(fù)、病毒復(fù)制、細胞標(biāo)記示蹤等方面。

實驗流程：

1 每孔加入100μL滲透劑(0.5% TritonX-100的PBS)脫色搖床孵育10分鐘；PBS清洗1次，5分鐘。

2每孔加入100 μL的EDU染色反應(yīng)液（配置比例見下表），避光、室溫、脫色搖床孵育30分鐘后，棄染色反應(yīng)液；

3染核：爬片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上避光晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后滴加dapi染液，或hochest染液室溫避光染核10min。

4封片：爬片用PBS（PH7.4）洗滌3次，每次5min。爬片稍甩干后將有細胞的一面朝下用抗熒光淬滅封片劑將玻片封固在載玻片上封片。

5 鏡檢拍照：切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。（紫外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm；FITC綠光激發(fā)波長465-495nm，發(fā)射波長515-555 nm；555紅光激發(fā)波長550nm，發(fā)射波長590nm）

結(jié)果判讀：

DAPI染出來的細胞核在紫外的激發(fā)下為藍色，陽性表達為相應(yīng)熒光素標(biāo)記的紅光或者綠光

送樣運輸要求：

1.組織樣本放置于20倍樣本體積的固定液中固定24h以上，常溫運輸送樣。

2.石蠟切片常溫保存運輸

3.冰凍切片-20℃保存運輸

4.細胞爬片PFA固定15min后用無菌PBS洗滌后用無菌PBS浸泡，4℃冰袋保存運輸?shù)綄嶒炇摇?/span>

注意事項：

1.檢測之前需動物活體注射化學(xué)試劑EdU，細胞需用化學(xué)試劑EdU處理造模，否則無陽性。