BrdU染色

服務介紹：

可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期)，滲入正在復制的DNA分子，活體注射或細胞培養(yǎng)加入，而后利用抗Brdu單克隆抗體，ICC染色，顯示增殖細胞。同時結合其它細胞標記物，雙重染色。

實驗流程：

1.加破膜液破膜20min；

2.DAPI染核8min；

3.用4%的多聚甲醛固定10min；

4.用純水稀釋鹽酸(鹽酸：純水=1:7)，滴加到爬片上37℃孵育40min；

5.用4%的多聚甲醛固定10min；

6.加3%BSA封閉，孵一抗4℃過夜，PBS沖洗3次；

7.孵二抗50min， PBS沖洗3次；

8.滴加一滴抗熒光淬滅封片劑封片，顯微鏡觀察。

備注：組織樣本的BRDU 染色，可以按照常規(guī)的免疫熒光流程進行操作，不需要用鹽酸處理。細胞樣本的BRDU染色，則需要嚴格按照以上的步驟進行。

送樣運輸要求：

1.組織樣本放置于20倍樣本體積的固定液中固定24h以上，常溫運輸送樣。

2.石蠟切片常溫保存運輸

3.冰凍切片-20℃保存運輸

4.細胞爬片PFA固定15min后用無菌PBS洗滌后用無菌PBS浸泡，4℃冰袋保存運輸到實驗室。

注意事項：

1.BRDU,檢測之前需動物活體注射化學試劑brdu，細胞需用化學試劑brdu處理造模，否則無陽性。