TUNLE即原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)。凋亡細(xì)胞的DNA雙鏈斷裂或一條鏈出現(xiàn)缺口，產(chǎn)生一系列3′-OH末端，在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）作用下，將脫氧核糖核苷酸和生物素所形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3′末端，從而進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測(cè)。TUNEL檢測(cè)

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更新時(shí)間：2025-02-09

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TUNEL檢測(cè)

TUNLE即原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)。凋亡細(xì)胞的DNA雙鏈斷裂或一條鏈出現(xiàn)缺口，產(chǎn)生一系列3′-OH末端，在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）作用下，將脫氧核糖核苷酸和生物素所形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3′末端，從而進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測(cè)。TUNEL是分子生物學(xué)與形態(tài)學(xué)相結(jié)合的研究方法，對(duì)單個(gè)凋亡細(xì)胞核或凋亡小體進(jìn)行原位染色，能準(zhǔn)確的反應(yīng)細(xì)胞凋亡典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征，可用于石蠟包埋組織切片等等。

TUNEL檢測(cè)的原理:

細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時(shí)抽提DNA進(jìn)行電泳檢測(cè)，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder?；蚪MDNA斷裂時(shí)，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上熒光素 (FITC) 標(biāo)記的dUTP (fluorescein-dUTP) ，從而可以通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，這就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的原理。

石蠟切片	取下適當(dāng)?shù)男迈r的組織塊固定于4%-10%濃度的多聚甲醛或中性甲醛中，甲醛與組織塊體積比在10:1和20:1之間，4攝氏度保存運(yùn)輸；
冰凍切片	取下的新鮮組織應(yīng)立即放入超低溫冰箱或者液氮中，用干冰運(yùn)輸，固定好的切片應(yīng)于-80或者-20度保存，并盡快用于檢測(cè)；
細(xì)胞爬片	細(xì)胞爬片4%多聚甲醛4度固定30min，換PBS緩沖液4度保存運(yùn)輸，盡快用于檢測(cè)；