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己糖激酶（HK）實(shí)驗(yàn)代測(cè)

己糖激酶（hexokinase,HK）是一種轉(zhuǎn)移酶，專一性不強(qiáng)，受葡萄糖-6-磷酸和ADP的抑制，Km（米氏常數(shù)）小、親和性強(qiáng)，可以針對(duì)多種六碳糖進(jìn)行作用。
測(cè)定原理：應(yīng)用6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G-6-PD）的偶聯(lián)反應(yīng)，在提供足量的底物條件下生成NADPH，在340nm波長(zhǎng)處，通過(guò)測(cè)定吸光度的增加值來(lái)反應(yīng)HK的活性。　
已糖激酶廣泛存在于以糖為能源的細(xì)胞，但在酵母、肝臟、肌肉、腦等多。該酶可被結(jié)晶化。動(dòng)物的已糖激酶是作為同工酶而存在的。已糖激勵(lì)機(jī)制酶遺傳性缺乏是導(dǎo)致非球形細(xì)胞溶血性貧血的原因之一。建立紅細(xì)胞HK的測(cè)定方法對(duì)研究不明原因的溶血極為重要。
應(yīng)用6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G-6-PD）的偶聯(lián)反應(yīng)，在提供足量的底物條件下，在340nm波長(zhǎng)處，通過(guò)測(cè)定吸光度的增加值來(lái)反映HK的活性。
產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)如下：
1、快速簡(jiǎn)便：全程約1小時(shí)，可測(cè)50例左右樣本。
2、取樣量微：本法取樣量?jī)H為50l。
3、穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放3個(gè)月有效。
4、再現(xiàn)性好：變異系數(shù)CV=1.2%。
5、回收試驗(yàn)： X =103%。
6、受外界影響因素小：干擾因素少，重復(fù)性強(qiáng)。
7、測(cè)試面廣：可測(cè)動(dòng)物血清(漿)、組織    、紅細(xì)胞（有單獨(dú)試劑盒）以及各種水產(chǎn)等，效果均佳。
所需儀器及自備試劑：
1、紫外分光光度計(jì)（比色測(cè)定波長(zhǎng)為340nm）
2、恒溫水浴箱或氣浴箱（溫度為37℃）
3、臺(tái)式離心機(jī)
4、漩渦混勻器
5、微量移液器
樣本收集與前處理：
血清（漿）可直接測(cè)定。
動(dòng)物組織樣本：可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液，離心取上清測(cè)定。
培養(yǎng)細(xì)胞：常用PBS作為勻漿介質(zhì)破碎后離心取上清測(cè)定。
具體的樣本前處理：參考我們隨貨發(fā)送的《實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》以及試劑盒中詳細(xì)說(shuō)明書(shū)。
操作流程：
1、按說(shuō)明書(shū)操作將配好的混合液37℃水浴10分鐘后加R5和樣本50l
2、340nm波長(zhǎng)，0.5cm光徑，測(cè)得OD值為A1
3、20分鐘340nm波長(zhǎng)，0.5cm光徑，測(cè)得OD值為A2

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