肌酸激酶（CK）測定試劑盒

（比色法）

一、測定原理：

肌酸激酶(Creatine Kinase，CK)催化三磷酸腺苷和肌酸，生成磷酸肌酸，后者很快全部水解為磷酸，此時三磷酸腺苷

和二磷酸腺苷仍穩(wěn)定，加入鉬酸銨可生成磷鉬酸，可進一步還原成鉬藍，根據(jù)生成無機磷的量可算出酶的活力。

二、試劑組成與配制：（50 管/24 樣）

試劑一：液體 6mL×1 瓶，冷凍或者 4℃保存 3 個月。

試劑二：液體 1.5mL×1 瓶，冷凍或者 4℃保存 3 個月。

試劑三：粉劑 2 支，臨用時每支加雙蒸水 2 mL，4℃保存 6 個月。(注:粉劑量較少,可能附著于管壁或蓋子上,并非

空管,如使用時肉眼不可見,可將其 4000 轉/分鐘離心2 分鐘后使用)

試劑四：粉劑 1 支，臨用前每支加雙蒸水 6mL, 4℃保存 6 個月。

試劑五：粉劑 2 支，冷凍保存 6 個月，臨用時每支加雙蒸水

2mL。配好后-20℃以下保存 5 天。

試劑六：液體 6mL×1 瓶，室溫或 4℃保存 6 個月。

試劑七：粉劑×1 瓶，4℃保存 6 個月，加雙蒸水 60mL，可適

當加熱溶解，溶解后即為試劑七應用液，4℃保存。

試劑八：粉劑×2 瓶，

4℃保存 6 個月，臨用時每支加雙蒸水 20mL，

溶解后即為試劑八應用液 4℃保存，顏色變深后棄用。

2.5mol/L 硫酸：50mL×1 瓶,室溫保存 6 個月。

附帶雙蒸水 200mL，供配制試劑時用。

定磷劑的配制：試劑七應用液︰試劑八應用液︰雙蒸水︰

2.5mol/L 硫酸= 1︰1︰2︰1。配好的定磷劑應為淺黃色，

若無色則失效，若呈藍色則為磷污染，定磷劑需現(xiàn)用

現(xiàn)配。配好后 4℃可保存 48 小時。

四、注意事項：

1、所有樣品均要檢測測定管及對照管。

2、組織勻漿 4℃存放不可超過 10 小時，組織塊冷凍可延長存

放時間。

3、血清 4℃存放不可超過 10 小時，冷凍可延長存放時間。

4、此法為微量，靈敏，快速法。所以對測定管子要求嚴格，要

沒有一點磷的管子，若放過 H3PO4或其緩沖鹽的管子，一

定要洗得非常干凈，用洗滌劑加水煮，再用自來水沖，最

后用雙蒸水沖。

這樣可以避免磷污染。這一點很重要，常常是實驗成敗的

關鍵因素。

5、定磷劑配好后，不可放置太久，一般 4℃可保存 48 小時，現(xiàn)用現(xiàn)配。隨時放冰箱。

6、大批量樣本操作時，采用簡化操作法，這樣快捷、準確。

7、所有配試劑的器皿要專用，或者用新的（包括吸硫酸的吸管，

及盛雙蒸水的器皿以及吸各種試劑的吸嘴）。

五﹑取樣濃度的摸索：

類不同，其取樣濃度不同。根據(jù)

CK 標準曲線(見附錄)，在每測定一種新的樣品前，最

好摸索一個取樣濃度，一般把OD 值控制在

0.05～0.5 之間。

1、血清（漿）取樣濃度的摸索：

由于正常情況下血清（漿）中的 CK 活力比較低。

但是如果用戶的模型組的 CK 活力會明顯增高，那在批量實驗前取模型組做個預試，一旦 CK 活力＞

3.5U/mL，就需要用生理鹽水將該模型組血清稀釋后檢

測。若含量太高（曲線的平坦部分）,則看不出組與組

之間的顯著性差異。

2、組織勻漿取樣濃度的摸索：

如果您使用本試劑盒測試某一種新的樣品時，先做三支不同濃度的測試管。例如測肌肉組織勻漿，取

樣濃度分別為 1%、2%、5%，然后計算酶的濃度，選

取酶的濃度在 0.01～0.1mg/mL（即：酶活力在 0.35～

3.5U/mL，此段曲線基本呈直線關系）的樣本濃度為最

佳取樣濃度,進行批量實驗。

肌酸激酶（CK）測定試劑盒