TTC 染液

(貨號(hào):D025-1 TTC Stain)

試劑組成

試劑配制

TTC 染色1 號(hào)染色液配制:臨用前將 1支 TTC 粉劑倒入1 瓶溶劑中，充分溶解混勻。

組織沖洗應(yīng)用液的配制。臨用前取組織沖洗濃縮液 1瓶，用蒸溜水 1:9 稀釋(即 10 倍稀釋)配成組織沖洗應(yīng)用液 100ml。(可一次性稀釋，也可按 1: 9 比例需多少稀釋多少)。

4%多聚甲醛固定應(yīng)用液的配制:

1. 臨用前將多聚甲醛溶劑貯備液5ml 用蒸溜水 1:19 稀釋(即 20 倍稀釋配成應(yīng)用液 100ml。2.將多聚甲醛粉劑1 瓶倒入已配好的應(yīng)用液 100m 中，100攝氏度左右水浴，用玻璃棒邊加熱邊攪動(dòng)直至溶解。因多聚甲醛有刺激性，請(qǐng)?jiān)谕L(fēng)櫥內(nèi) 配制。

儲(chǔ)存條件及有效期

本試劑盒應(yīng)置室溫避光密封保存，有效期一年。

樣本前處理

動(dòng)物樣本前處理：

1小動(dòng)物用 0.4%戊-巴-比-妥-鈉 (50mg/kg) 麻醉后，用組織沖洗應(yīng)用液經(jīng)腹主動(dòng)脈灌注將組織中的血液沖洗干凈。(腦組織不需要沖洗，若心臟等梗塞需將血液沖洗干凈)

2、然后快速取腦組織或其它組織，將取下的組織在冷生理鹽水中漂洗后，放-20°C冰箱中速凍20 分鐘左右。注:(有時(shí)腦組織放-20C冰箱中凍二周后染色仍然很好)

3、染色前可從冰箱中取出組織,迅速用快刀每隔 2mm 切片備用。若組織變軟,還可放入-20C冰箱繼續(xù)冰凍，變硬后再切。切片時(shí)放在冰塊上。操作時(shí)在冰塊上放上錫箔紙，墊在組織與冰塊之間，這樣組織不會(huì)粘在冰塊上。

植物樣本前處理：

若植物造模，可將所需染色植物用開(kāi)水燙死，此組織不著色。而未用開(kāi)水燙的活組織(有生命力的組織)應(yīng)呈玫瑰紅色。

染色步驟

1.將新鮮組織切片置裝有 TTC 染色液的最小器皿中(如小培養(yǎng)皿或 6孔板、12 孔板、24 孔板中)， 37攝氏度避光孵育 15~30min （孵育箱可以是氣浴箱或水浴箱。）邊孵育邊觀察樣本顏色變化。

注：動(dòng)物組織切片非梗死區(qū) 呈玫瑰紅色，梗死區(qū)組織發(fā)白。

植物樣本活組織呈玫瑰紅色，死組織及無(wú)生命力的組織不著色。

2.將已染過(guò)的 TTC 染色液用移液器取出放到另一個(gè)器皿中，4~8攝氏度保存(TTC 染液可反復(fù)染色 2~3 次).

3.然后吸取已配好的組織沖洗應(yīng)用液將組織表面多余的染色液沖洗掉，此時(shí)可肉眼觀察

并立即照相。

4.若需長(zhǎng)久保存，可用 4%多聚甲醛固定應(yīng)用液固定。

染色結(jié)果

鏡檢結(jié)果：

動(dòng)物組織:非梗死區(qū)染為紅色，梗死區(qū)呈灰白色，紅色區(qū)與灰色區(qū)之間為缺血區(qū)

植物樣本:活組織呈玫瑰紅色，死組織及無(wú)生命力的組織不著色。

TTC 染液