超微量 Ca 2+ -ATP 酶測試盒

（測紅細(xì)胞）

一、試劑組成與配制：

二、紅細(xì)胞的前處理：

①、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（見附錄）或血紅蛋白測定（試劑本所

有售）。

②、紅細(xì)胞溶血液的制備：

a、壓積紅細(xì)胞溶血液的制備：取肝素抗凝全血，1000

轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，棄上層血清，留下層壓積

紅細(xì)胞，取一定量的壓積紅細(xì)胞，加 49 倍的雙

蒸水，例如取 5μL 的壓積紅細(xì)胞加入 245μL 雙蒸

水中，混勻，使其充分溶血，對光觀察直至溶液

透亮。如果預(yù)試結(jié)果太高，再將溶血液稀釋成不

同濃度再進(jìn)行預(yù)試后，再決定取樣濃度。

b、全血紅細(xì)胞溶血液的制備：取小鼠全血，輕輕搖

勻，取一定量的全血按照 1：24 的體積比加 24 倍

雙蒸水，制成 25 倍稀釋的溶血液，例如取 5μL

的全血加雙蒸水 120μL 充分混勻，制成 25 倍稀釋

的溶血液。對光觀察直至溶液透亮。如果預(yù)試結(jié)

果太高，再將溶血液稀釋成不同濃度再進(jìn)行預(yù)試

后，再決定取樣濃度。

[注 1]：制備好的溶血液盡快進(jìn)行檢測 否則易失活

因而必須在所有的準(zhǔn)備工作做好以后再配制

溶血液。

[注 2]：用不完的抗凝全血 4℃可保存 2～3 天， -20℃

以下保存一周或者更長時(shí)間。

[注 3]：不可用磷酸鹽緩沖液或含磷的試劑稀釋樣本。

[注 4]：預(yù)試結(jié)果將絕對吸光度值（測定管吸光度值—

對照管吸光度值）控制在 0.2 左右為宜。

四、全血中 ATPase 的計(jì)算公式：

1、按紅細(xì)胞數(shù)計(jì)算：

①、定義：規(guī)定每小時(shí)每 10 7 個紅細(xì)胞中 ATP 酶分解

ATP 產(chǎn)生 1µmol 無機(jī)磷的量為一個 ATP 酶

活力單位。即微摩爾磷/10 7 紅細(xì)胞/小時(shí)

（µmolPi/10 7個 RBC/hour）

(U/10 7個 RBC)。

2.8:反應(yīng)體系稀釋倍數(shù)(280μL /100μL);

N:樣本測試前稀釋倍數(shù);

3、按血紅蛋白量計(jì)算：

①、定義：規(guī)定每小時(shí)每克血紅蛋白相當(dāng)?shù)募t細(xì)胞中

ATP 酶分解 ATP 產(chǎn)生 1µmol 無機(jī)磷的量為

一個 ATP 酶活力單位。即微摩爾磷/克血紅

蛋白/小時(shí)（µmolPi/gHb/hour）。

C 標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)品濃度,0.02μmol/mL;

T:反應(yīng)時(shí)間,10min;

2.8:反應(yīng)體系稀釋倍數(shù)(280μL /100μL);

N:樣本測試前稀釋倍數(shù);

CHb:溶血液血紅蛋白濃度,gHb/mL。

五、測定意義：

ATP 酶存在于組織細(xì)胞及細(xì)胞器的膜上，是生物膜

上的一種蛋白酶，它在物質(zhì)運(yùn)送、能量轉(zhuǎn)換以及信息傳

遞方面具有重要的作用，機(jī)體在缺氧及一些疾病狀態(tài)下，

此酶活力發(fā)生一系列改變。

六、測定原理：

ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及無機(jī)磷，測定無機(jī)

磷的量可判斷 ATP 酶活力的高低。

附錄Ⅰ：紅細(xì)胞計(jì)數(shù)法

紅細(xì)胞計(jì)數(shù)有以下三種方法，只需取其中一種即可以。

1、計(jì)數(shù)板直接紅細(xì)胞計(jì)數(shù)：

①、紅細(xì)胞稀釋液的配制：檸檬酸三鈉 3.8 克，甲醛 1mL，

雙蒸水 100mL，混勻，4℃保存。

②、取 1 支試管，加入紅細(xì)胞稀釋液 2mL，取抗凝全血

10µL 加入試管稀釋液中，反復(fù)吹吸數(shù)次，再將試管顛

倒數(shù)次混勻。

③、取一滴稀釋血液灌入計(jì)數(shù)板。（應(yīng)一次灌滿，而且不

要灌得太多。）

④、用高倍鏡計(jì)數(shù)左上、左下、右上、右下，中央 5 個中

方格的紅細(xì)胞數(shù)，將數(shù)得的數(shù)字×10 10，即為每升血中

的紅細(xì)胞數(shù)。

2、光電比濁法計(jì)紅細(xì)胞數(shù)：

取試管 1 支，加入上述紅細(xì)胞稀釋液 4mL，再取 20µL

抗凝全血，加入 4mL 稀釋液中，反復(fù)吹吸數(shù)次，再將試

管顛倒數(shù)次混勻，立即倒入比色杯中，于 540nm，1cm 光

徑，雙蒸水調(diào)零進(jìn)行比色，記下吸光度值。以計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)

的紅細(xì)胞的數(shù)值為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)管的吸光度值為縱坐

標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線。您可以不做曲線，用附錄Ⅱ參考標(biāo)準(zhǔn)曲

線圖二（鼠紅細(xì)胞數(shù)與比濁法吸光度換算曲線）。根據(jù)標(biāo)

準(zhǔn)曲線查出紅細(xì)胞數(shù)。

3、用血紅蛋白（Hb）來換算紅細(xì)胞數(shù)：

取 10µl 抗凝全血加入 2.5mL 血紅蛋白測試液（本所

有供應(yīng)）中，混勻，靜置 10 分鐘，于 540nm，1cm 光徑，

雙蒸水調(diào)零進(jìn)行比色。將測得的吸光度乘以 367.7 即為血

紅蛋白的值。以計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的紅細(xì)胞的數(shù)值為橫坐標(biāo)，以

相應(yīng)管的血紅蛋白數(shù)為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線。您可以不做

曲線，用附錄Ⅱ的參考標(biāo)準(zhǔn)曲線圖一（鼠紅細(xì)胞數(shù)與血紅

蛋白數(shù)的換算曲線）。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出紅細(xì)胞數(shù)。

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